Registreringskrav til sporedrepende midler

Sporedrepende midler brukes til å drepe sporer på harde, ikke-porøse overflater og gjenstander. Bakteriesporer er regnet som den vanskeligste formen for mikrobielt liv å tilintetgjøre.

De amerikanske miljøvernmyndighetene EPA (Environmental Protection Agency) krever generering av data om effektivitet under kontrollerte testforhold for å hevde at antimikrobielle produkter har sporedrepende virkning. For å generere data om effektiviteten til sporedrepende midler, skal AOACs offisielle metode 966.04 Sporicidal Activity of Disinfectants følges. Å hevde at et flytende produkt for harde, ikke-porøse overflateter har sporedrepende virkning, innebærer at 60 bærere av penisylindere i rustfritt stål inokulerer sporer fra Bacillus subtilis (ATCC 19659) og Clostridium sporogener (ATCC 3584) i det sporedrepende middelet. Tre partier av produktet på mindre enn containerlast (LCL) av A.I.(-er) oppført på CSF-en til produktet, skal testes. I tilleg til dette kravet, må et sporedrepende middel også påvise et fravær av vekst (fullstendig død) på 60 bærere (30 bærere per organisme i ett parti) i en verifiseringstest. Verifiseringstester må utføres i et separat laboratorium eller med et nytt skift av personell.

I Europa utfører produsenter suspensjonstester i henhold til metoden EN13704 for å bevise sporedrepende aktivitet. For å hevde at det er sporedrepende må det oppnås en >3 logaritmisk reduksjon av Bacillus subtilis (ATCC 6633) med en kontakttid på maksimalt 60 minutter.

Den mest oppdaterte versjonen av EN13704 i 2018 ble utstett med en rekke endringer fra den forrige versjonen utgitt i 2002, inkludert endringer av sporepreparat og mottakelighetstest for testorganismer. 

EN13704-sporepreparat trenger 80 % av de vegetative cellene for å sporulere, og AOAC 966.04 trenger 95 % av de vegetative cellene for å sporulere.  Når sporesuspsensjonen tilberedes, krever EN13704 en mottakelighetestest for å sjekke ytelsen av suspensjonen mot to standard biocider, glutaraldehyd og pereddiksyre. Testene bruker to styrkegrader per biocid – høye og lave konsentrasjoner. For å oppfylle EN13704-godkjennelseskriteriene må sporesuspensjonen demonstrere overlevelse (<3 logaritmisk reduksjon) ved lav konsentrasjon og dreping (>3 logaritmisk reduksjon) ved høye konsentrasjon. AOAC 966.04 krever en test av saltsyrerestistens for å sjekke ytelsen til sporesuspensjonen i forhold til en 2.5 M HCI-standard. For å oppfylle AOAC 966.04-kriteriene for et akseptabelt nivå, må sporene motstå 2.5 M HCI i minst 2 minutter.

Bruken av sporesuspensjon i AOAC-testen av sporedrepende midler, og den grundige tilberedelsen og bruken av sporesuspensjoner i EN13704, sikrer at produkter som hevder å være sporedrepende blir tilstrekkelig utfordret udner testing av effektivitet.

Sporedrepende effekt hos kvaternær ammoniumsforbindelse

Kvaternære ammoniumsforbindelser (QAC-er) er kationiske overflateaktive midler og har en bredspektret aktivitet mot mikroorganismer, selv om de generelt sett er mer effektive mot gram-positive bakterier i lavere konsentrasjon enn mot gram-negative bakterier. De er merkbart mindre effektive mot sporedannere³. 

Mange biocider er bakteriedrepende eller bakteriestatiske i lave konsentrasjoner for ikke-sporulerende bakterier, deriblant de vegetative cellene til artene Bacillus og Clostridium. Høye konsentrasjoner av enkelte biocider kan være sporedrepende effektive (f.eks. glutaraldehyd og CRA-er). 

Derimot kan selv høye konsentrasjoner av alkohol, fenoler, QAC-er og klorheksidin mangle en sporedrepende effekt (selv om klorheksidin kan ha en sporedrepende effekt når den brukes under høy temperatur)⁴. 

QAC-er sporostatiske – de fortrenger fremveksten av sporer (utviklingen fra en vegetative celle fra en spirende spore), men ikke den faktiske spiringen (utviklingen fra en sovende til en metabolsk aktiv tilstand)².

QAC-er er sannsynligvis til en viss grad effektive mot vegetative celler av artene Bacillus og Clostridium, men er ikke i stand til å tilintetgjøre selve sporen.

Påstander om sporedrepende virkning krever testing utført mot sporer, ikke vegetative celler. For å opprettholde kontroll i renromsomgivelser, skal man bruker biocidale midler med sporedrepende aktivitet mot selve sporene.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance. Clin Micrbiol. 1999 Jan; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. Clin Microbiol Rev. 1990 Apr; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms. 1–27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores. Int J Pharm. 1986;34:51-56.